二手流式细胞仪常规检测时的样品怎么制备

　　二手流式细胞仪是一种基于常规流式细胞术的技术，其中光谱仪和多通道检测器代替了常规系统中的传统反射镜，滤光器和光电倍增管。可以快速进行多参数收集并分析单个细胞或颗粒上的数据。

 

　　流二手流式细胞可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把细胞亚群从中分选出来。仪器采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率;利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性;用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。
 

　　二手流式细胞仪常规检测时的样品制备
 

　　(一)直接免疫荧光标记法
 

　　取一定量细胞(约1X106细胞/ml)，直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，孵育20～60分钟后，用PBS(pH7.2～7.4)洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。
 

　　(二)间接免疫荧光标记法
 

　　取一定量的细胞悬液(约1X106细胞/ml)，先加入特异的*抗体，待反应*后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体-抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。