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二手PCR仪的对照实验一般有哪几种

发布时间:2022-01-24浏览:363次

  二手PCR仪是一种核酸检测和定量分析的新方法,可以作为传统实时定量PCR的替代方法,以实现一致定量及稀有等位基因的检测。数字PCR的工作原理在于将DNA或cDNA样品分割为许多单独、平行的PCR反应,部分这些反应包含了靶标分子(阳性),而其他不包含(阴性)。单个分子可以被扩增一百万倍或更多。在扩增期间,TaqMan化学试剂及染料标记探针可用于检测特定序列的靶标。当不存在任何靶标序列时,没有信号累积。PCR分析后,阴性反应片段用于生成样品中靶标分子的一致计数,而无需标准品或内标。
 
  纳流芯片的使用提供了便捷和直观的机制来同时平行运行上千个PCR反应。每个孔都加入了样品、扩增混合物和TaqMan测定试剂的混合物,然后进行单独分析以检测存在(阳性)或不存在(阴性)终点信号。考虑到孔可能接收到多个靶标序列分子,使用泊松模型应用了一个校正因子。
 
  一个合理的二手PCR仪实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施来防止和消除污染。对于PCR仪的对照实验一般有以下几种:
 
  1.重复性试验。
 
  2.选择不同区域的引物进行PCR扩增。
 
  3.阳性对照
 
  在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照,它是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高(100个拷贝以下)。但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大。因而当某一PCR试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。
 
  4.阴性对照
 
  每次PCR实验务必做阴性对照包括:
 
  ①标本对照
 
  被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照;
 
  ②试剂对照
 
  在二手PCR仪试剂中不加模板DNA或RNA,进行PCR扩增,以监测试剂是否污染。

 

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